高通量細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的基本原理是將待檢樣品通過(guò)流式系統(tǒng)連續(xù)傳送到光學(xué)檢測(cè)區(qū)域,采用一定的探測(cè)器對(duì)細(xì)胞進(jìn)行激發(fā)并測(cè)量細(xì)胞在不同光學(xué)參數(shù)下的特性。具體步驟如下:
1.激發(fā)光源:使用激光或LED等光源產(chǎn)生單一或多種波長(zhǎng)的光。這些光將通過(guò)光束整形系統(tǒng),使其獲得理想的光束形狀。
2.樣品注射:樣品通常被稀釋并加入試劑,以保證細(xì)胞在流動(dòng)時(shí)不會(huì)黏連在一起。樣品通過(guò)注射器被注入到裝有緩沖液的注射器中,并通過(guò)壓力控制一定的流速。
3.水平排列:通過(guò)加速流體以及流體的層流自動(dòng)調(diào)整,使細(xì)胞在流動(dòng)時(shí)保持單個(gè)、水平排列的狀態(tài),方便激發(fā)光的入射和測(cè)量。
4.激發(fā)和測(cè)量:選擇特定的濾光片、光柵和透鏡組合來(lái)引導(dǎo)激發(fā)光通過(guò)細(xì)胞,并測(cè)量光的散射、發(fā)射、吸收等特性。激發(fā)光在細(xì)胞表面相互作用并發(fā)生散射或激發(fā)產(chǎn)生熒光。根據(jù)光的強(qiáng)度、散射角度、發(fā)射光的波長(zhǎng)等參數(shù),可以推斷細(xì)胞的大小、形狀、顏色等信息。
5.數(shù)據(jù)處理:收集到的數(shù)據(jù)將被發(fā)送到計(jì)算機(jī)進(jìn)行處理。計(jì)算機(jī)根據(jù)設(shè)定的閾值和標(biāo)準(zhǔn),對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)、分類和分析。各種特征數(shù)據(jù)可以通過(guò)軟件進(jìn)行可視化顯示和輸出。
高通量細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的應(yīng)用:
1.細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,監(jiān)測(cè)細(xì)胞的生長(zhǎng)情況和濃度變化。
2.通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù),可以估算細(xì)胞的增殖速度、存活率以及死亡率等。
3.評(píng)估藥物對(duì)細(xì)胞的影響,如細(xì)胞毒性測(cè)試、細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)等。
4.臨床樣本的細(xì)胞計(jì)數(shù)和鑒定,如血液檢測(cè)、尿液分析等。
5.評(píng)估病菌或微生物的濃度,以判斷生物實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的安全狀況。
6.也可以用于測(cè)量植物細(xì)胞的數(shù)量以及相關(guān)參數(shù),如細(xì)胞體積等。
總的來(lái)說(shuō),高通量細(xì)胞計(jì)數(shù)儀在生命科學(xué)的研究和實(shí)驗(yàn)中有著廣泛的應(yīng)用,可以快速、準(zhǔn)確地計(jì)數(shù)大量細(xì)胞,并為研究提供可靠的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。